تعريف كلي فرم ها : باكتري هاي ميله اي گرم منفي بوده و به شكل هوازي و بي هوازي اختياري زندگي ميكنن . بدون اسپور و غير متحرك هستند و قادرند لاكتوز را مصرف كنند وتوليد گاز و اسيد بكنند . منشا كلي فرم ها در خاك و و مدفوع انسان وحيوانات خونگرم است از اين جهت كلي فرم هاي مدفوعي بسيار داراي اهميت ميباشند . به طور كلي كلي فرم ها شامل : اشرشيا كلي پاراكلو باكتريوم انترو باكتر و سيترو باكتر ميشوند . شرح آزمايش : مرحله 1 : در ابتدا 10 گرم از محيط كشت بريليانت گرين براث1 را در cc250 آب مقطر حل ميكنيم سپس درب ارلن را با فويل و پنبه مسدود ميكنيم و ارلن را روي شعله قرار ميدهيم . بعد از به جوش به آمدن 4 لوله آزمايش انتخاب كرده در داخل آن ها لوله دور هام 2 به صورت وارونه قرار ميدهيم . سپس cc 10 از محيط كشت برليانت گريث را داخل لوله ها ريخته و بعد از مسدود كردن درب لوله ها آن هارا به همراه سرم فيزيولوژي داخل اتوكلاو قرار ميدهيم . در گام بعدي ويلت رد بايل اگار 3 را به مقدار 2/16 گرم را در cc400 آب مقطر حل ميكنيم و درب ارلن را با پنبه و فويل مسدود كرده و آن را روي شعله قرار ميدهيم . و براي درست كردن سرم فيزولوژي نمك را 25/ 4 گرم نمك را در cc500 آب مقطر حل ميكنيم . توجه : رد بايل آگار را به علت اين كه نبايد در اتو كلاو قرار داد روي بن ماري4 قرار ميدهيم مرحله 2 : در گام اول در اين مرحله ماده مورد نظر كه در اين آزمايش پنير است را به مقدار 5 گرم وزن كرده و داخل هاون چيني قرار داده و به آرامي شروع به له كردن آن ميكنيم . در حين له كردن پنيرcc 45 سرم فيزيولوژي را به تدريج به پنير اضافه ميكنيم . بعد از به دست آمدن يك سوسپانسيون مطلوب 3 لوله آزمايش را انتخاب كرده و در هر كدام cc9 از سرم اضافه ميكنيم . در اين مرحله بايد توجه داشت كه سوسپانسيون داخل هاون رقت 1/0 است . به وسيله پيپت cc 1 از داخل هاون برداشته و داخل لوله شماره يك ميريزيم و لوله را به خوبي تكان ميدهيم . سپس cc 1 از لوله اول برداشته و داخل لوله دوم ريخته و لوله را تكان ميدهيم . اين عمل را براي لوله سوم تكرار ميكنيم . براي هر لوله ميتوان از يك پيپت جدا گانه استفاده كرد تا نتايج بهتر شود توجه : در صورتيكه از يك پيپت استفاده ميشود بايد نمونه هارا از آخرين رقت شروع كنيم چون اگر از اولين رقت شروع كنيم بقيه رقت ها به دليل رقيق نمودن رقت قبلي خوب رقيق نميشوند و باعث اختلال در آزمايش ميشوند. مرحله 3 : بعد از تهيه رقت ها و شماره گذاري آن ها از هر رقت cc 1 داخل لوله هاي حاوي محيط كشت bgb ريخته و اين لوله هارو هم شماره گذاري ميكنيم . در انتها از هر رقت cc1 داخل پليت ريخته كف پليت را با محيط كشت vrba پر ميكنيم . پليت ها را شماره گذاري كرده و بعد از انجام حركت دوراني آن را به صورت وارونه داخل اينكو باتر قرار داده و بعد از 24 الي 48 ساعت بايد بررسي شود در صورت وجود گاز در داخل لوله هاي دورهام و وجود كلني هاي در پليت ها نمونه مورد نظر داراي كلي فرم بوده و مصرف آن خطر ناك است نتيجه : نمونه هاي اين گروه فاقد گاز و كلني بوده و پنير فاقد كلي فرم بوده است . تعريف اصطلاحات : 1 - محيط كشت بريليانت گرين براث : تركيبات اصلي اين محيط كشت شامل : پپتون لاكتوز اكس بيل ( صفراي گوساله نر ) و بريليانت گرين است اين محيط كشت يك محيط كشت انتخابي براي شمارش اشرشياكلي وساير باكتري هاي كلي فرمي مدفوعي در مواد غذايي است . صفرا و بريليانت گرين به عنوان مهار كننده عمل كرده و از رشد باكتري هاي گرم مثبت جلو گيري ميكنند . تخمير لاكتوز با تشكيل گاز در لوله دروهام نشان دهنده و جود اشرشيا كلي و ديگر كلي فرم هاي مدفوعي است . اين محيط كشت بعد از تهيه به رنگ سبز شفاف است 2- لوله دورهام : لوله شبهيه لوله آزمايش بوده ولي در ابعاد كوچكتر . وظيفه ان نشان دادن حركت گاز است . 3 – محيط كشت ويولت رد بايل آگار : تركيبات اين محيط كشت شامل : پپتون از گوشت عصاره مخمر كلرور سديوم لاكتوز مخلوط نمك هاي صفراوي نوترال رد كريستال ويوله و آگار است در اين محيط كشت كريستال ويوله و نمك هاي صفراوي تا حد زيادي فلور باكتريايي همراه را مهار ميكنند و تجزيه قند لاكتوز موجود در آن با توليد اسيد همراه است كه با تغيير رنگ معرف نوترال رد به قرمز يا له هاي رسوبي نمك هاي صفراوي در اطراف كلني ها مشخص ميشود . بعد از آماده سازي شفاف تا حدي قرمز رنگ است . در اين محيط نيز باكتري هاي لاكتوز مثبت مثل اشرشيا كلي كلنيي هاي قرمز رنگ و باكتري هاي لاكتوز گرم منفي مثل سالمنولا كلنيي هاي بي رنگ ايجاد ميكنند . 4- بن ماري : براي ثابت نگه داشتن دماي براي برخي محيط هاي كشت و براي ذوب كردن برخي محيط هاي منعقد شده از اين وسيله استفاده ميشود